痕量亚硝胺类杂质高灵敏度检测方法的开发与验证

文章来源：https://www.catorm.com 发布时间：2025-02-28 浏览次数：11

亚硝胺类化合物(N-亚硝基胺，简称NA)是一类具有致癌性、致突变性和致畸性的化学物质，普遍存在于食品、药品、化妆品等多种产品中。近年来，全球多个国家和地区的药品监管部门相继发布了关于亚硝胺类杂质控制的指导文件，对痕量NA的检测提出了更高要求。本文介绍痕量亚硝胺类杂质高灵敏度检测方法的开发与验证过程。

检测方法的开发背景

亚硝胺类杂质的检测难点主要体现在以下几个方面：首先，其在药品和原料药中含量极低，通常在ppb甚至ppt级别；其次，不同亚硝胺类化合物的物理化学性质存在显著差异，难以采用单一方法进行全面检测；最后，复杂基质对微量杂质的干扰较大，影响检测的准确性和灵敏度。因此，开发高灵敏度、高特异性的检测方法对于保障药品安全至关重要。

高灵敏度检测方法的开发

样品前处理技术

针对不同基质的特点，本研究开发了多种样品前处理技术：

· 固相萃取(SPE)：利用不同极性吸附剂对亚硝胺进行选择性吸附与洗脱

· 液液萃取(LLE)：基于亚硝胺在不同溶剂中分配系数的差异进行分离

· 超声辅助萃取(UAE)：提高萃取效率，缩短前处理时间

· 分子印迹聚合物(MIP)技术：提高选择性，降低基质干扰

仪器分析方法

本研究采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)作为亚硝胺类化合物的主要检测技术，并进行了以下优化：

1. 色谱条件优化：评估多种色谱柱和流动相组合，选择HILIC柱对极性亚硝胺和C18柱对中低极性亚硝胺进行分离

2. 质谱参数优化：建立多反应监测(MRM)模式，选择高特异性的母离子-子离子对，提高检测灵敏度

3. 离子源优化：比较ESI、APCI等不同离子化技术，确定最佳离子化条件

方法验证

开发的检测方法按照ICH Q2(R1)指南进行全面验证，验证项目包括：

1. 特异性

通过空白、标准品、加标样品和实际样品的比较，确认方法对7种常见亚硝胺(NDMA、NDEA、NMBA、NIPEA、NDIPA、NEIPA和NDBA)具有良好的特异性，无明显干扰峰。

2. 线性和范围

所有目标亚硝胺的线性相关系数R²>0.998，线性范围覆盖0.01-10.0 ng/mL，满足痕量检测需求。

3. 准确度和精密度

在低、中、高三个浓度水平(LOQ、5×LOQ和10×LOQ)的回收率为85.3%-108.6%，RSD<10%，符合方法验证要求。

4. 检测限和定量限

方法检测限(LOD)达到0.003-0.01 ng/mL，定量限(LOQ)为0.01-0.03 ng/mL，满足各国法规对亚硝胺类杂质的控制要求。

5. 稳定性

样品和标准品在室温、冷藏和冷冻条件下均具有良好的稳定性，72小时内浓度变化<5%。

方法应用

该方法已成功应用于多种药物制剂和原料药中亚硝胺类杂质的检测，包括沙坦类、甲硝唑、雷尼替丁等高风险药品。通过系统的风险评估和检测，及时发现了部分批次产品中亚硝胺含量超标的情况，为药品质量控制提供了可靠的技术支持。

结论与展望

本研究开发的痕量亚硝胺类杂质高灵敏度检测方法具有特异性强、灵敏度高、重现性好等特点，能够满足药品质量控制的严格要求。未来研究将进一步扩展亚硝胺类化合物的检测范围，结合先进仪器技术如高分辨质谱(HRMS)提高检测能力，并探索更高效的样品前处理技术，为药品安全提供更全面的技术保障。